麒麟菜和卡帕藻属海藻ISSR的初步分析（上海海洋大学水产与生命科学学院，上海） 修订日期：. 基金项目： 上海市浦江人才计划项目（） 上海市优秀学术带头人计划项目（） 湖北省襄樊市人，目前在读硕士，主要从事海洋生物学研究。 @博士导师。 邮箱：pmhe@关键词：麒麟菜； ISSR； 物种鉴定 CLC 号：Q949 文章编号：（2011） 简介 麒麟菜（）是一种生产卡拉胶的热带经济红藻，根据卡拉胶的种类分为 3 种麒麟菜（），其年工业产值可达 US$2.4十亿。 国际卡拉胶产量的90%是通过中国、菲律宾和印度尼西亚的大规模人工养殖维持的。 早期的麒麟菜分类主要是根据商业价值结合形态特征进行分类。 匡梅等人。 研究了形态、固定和内部结构，重点研究了精子囊和四分孢子囊的结构。 我国麒麟菜的分类受到环境等因素的影响。 这种影响会导致颜色、形态的变化，甚至基因结构的变化。 工业便利、商业名称的广泛使用以及与学名混淆的藻体本身没有特别明显的外部区分特征，阻碍了麒麟菜科的分类和遗传多样性的研究。 。

2008年，中国、菲律宾、印度尼西亚等国的麒麟菜种植区爆发大规模冰洋白化病，造成巨大经济损失，促进了大量新物种的引进。 由于经过20多年的简单无性繁殖，我国主要养殖的麒麟菜品种具有不同类型的卡拉胶。 不同品种的卡拉胶的含量、凝胶强度和硬度也不同，不同的行业需要特定类型的卡拉胶ISSR。 基于SSR10开发的新型分子标记技术]. 已用于紫12]和江蓠的亲缘关系和选育辅助育种。 因此，本研究主要利用ISSR技术从分子角度分析我国几种麒麟菜及引种物种之间的遗传多样性，为麒麟菜科的分类和分子标记辅助育种提供一定的理论依据。 材料 12株实验材料中，该菌株属于卡帕藻属。 其具体来源及形态特征见表1。 基因组DNA提取采用改进的DNA提取方法]和植物基因组DNA提取试剂盒（天根生化科技有限公司，DP305）。 将提取的DNA进行8%琼脂糖凝胶电泳并在UV相机（Bio-Rad，美国）下拍照以检测DNA模板的完整性。 ISSR引物筛选和PCR扩增根据文献[15-16]和加拿大大学公布的ISSR引物序列（http:..ubc.ca//NAPS/.set/.pdf）选择扩增效果来自 30 个引物。 好的引物用于后续的PCR扩增。 引物由上海生工生物工程有限公司合成，引物的序列信息和扩增结果可在12个麒麟菜菌株的保藏信息号（样本）和藻类特征采集地（产地）采集中查到。次）红棕色，主枝粗，细枝多，无突起福建莆田（引自菲律宾））绿色，主枝细，对生或轮生枝，无突起马来西亚（红棕色，主枝粗，粗枝少，多疣状突起。生的，刺状突起海南陵水（印度尼西亚）红棕色，分枝细，少而长，无突起三亚海南（引自菲律宾））红棕色，主枝细，分枝细。对生或轮生，有刺 海南陵水（菲律宾）（）棕色，主枝粗大，对生分枝多，无明显突起 海南陵水（越南））红棕色，主枝粗大，分枝多，无明显突起 坦桑尼亚（红棕色，枝条细、少而长、无突起 海南陵水（引自菲律宾） () 红棕色，主枝细，枝条细，有刺突起 坦桑尼亚 () 颜色绿色，主枝细，枝条细，有刺突起坦桑尼亚引物序列及扩增结果引物序列扩增点100//)/0VHV(GT)100/扩增系统及程序参考[17]。

扩增产物经2%琼脂糖电泳检测，（）表示DNA片段大小，并在紫外相机（Bio-Rad，美国）下拍照。 数据分析计算 ISSR 扩增条带的存在或不存在。 否则，强条带和可再现的弱条带记录为 0。 电泳结果转换成二进制数据矩阵并输入计算机。 软件计算遗传距离和多样性指数（然后使用MEGA4软件根据遗传距离对两个属的样本进行UPGMA和NJ聚类分析。可以使用改进的CTAB方法和植物试剂盒方法提取基因组DNA，可以提取完整性良好的DNA，如图1所示，作为PCR反应的ISSR-模板进行筛选和分析，从30个引物中筛选出5个扩增条带清晰、稳定、多态性的引物（两条扩增条带的大小）。属（350~000bp）之间，其中引物841（见图2）在卡帕藻属藻类中扩增出一条大小为600 bp的条带，在卡帕藻属藻类中扩增出一条大小为600 bp的条带麒麟菜，而在麒麟菜西沙(XS)中扩增出750 bp的特异性条带和)。 根据表3，XS和FLBc之间的最大遗传距离为0078。两个属之间的最小遗传距离为0078。XS和FLBc之间的最大遗传距离为0078。多样性指数（CTAB多态性位点在属中的百分比） 《海洋学报》33个样本的基因组DNA电泳图谱分别为100%和9189%（见表5）。 根据遗传距离对两个属的海藻进行聚类分析（UPGMA聚类）。 类分析表明，结果是一个分支，其他结果聚集到另一个分支中。

麒麟菜DNA的提取 提取高质量的DNA是分子遗传学研究的基础。提取海藻DNA的难点在于多糖的去除。 12个样品中引物841的扩增电泳图谱分别为FLBx、8YN、10LA、11Tr。 卡帕藻属 12 种海藻之间的遗传距离。 麒麟菜属海藻物种之间的遗传距离。 麒麟菜和卡帕叶属遗传变异统计结果的初步分析。 多样性指数（100 麒麟菜 9189）。 传统的CTAB方法可以产生高质量的DNA 14,17]但提取过程需要较长的时间。 从图1可以看出，植物试剂盒法也可以提取完整性良好的DNA，并作为PCR反应的模板。 与CTAB法相比，缩短了实验时间，提高了实验效率。 FLBc，洛杉矶，外部。 形态学鉴定为 ，遗传距离为

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